齐口裂腹鱼鳃丝细胞系的建立、鉴定及免疫研究

齐口裂腹鱼(Schizothorax prenanti)是长江上游水域的珍稀鱼类, 近年来由于环境变化和疾病爆发野外齐口裂腹鱼数量急剧减少, 现已被列入长江上游二级急切保护的特有鱼类, 因此, 对齐口裂腹鱼的保护刻不容缓。建立齐口裂腹鱼细胞系是保护其种质资源的有效手段, 也可以在不伤害现有鱼群的条件下进行多种齐口裂腹鱼相关生物学研究。本研究建立了首个来源于齐口裂腹鱼的细胞系, SPG 细胞系。原代细胞分离自齐口裂腹鱼鳃丝组织, 呈均一的上皮状, 使用含 15%血清的 L-15 培养, 在 15 个月时间里成功传至 55 代。线粒体 COI 基因鉴定, 证明该细胞来源于齐口裂腹鱼, 核型检测细胞染色体数目为 2n=96。在液氮中保存 12 个月的细胞, 复苏后能保持 75%以上活力。EGFP-N3 质粒转染 SPG 细胞后观察到明显的绿色荧光蛋白表达。病毒类似物 poly(I:C)和大肠杆菌脂多糖 LPS 可引起细胞 IL-1β、IL-8、TNFa 和 TLR22 等免疫相关基因表达量升高。表明本研究建立的齐口裂腹鱼鳃丝细胞系可用于免疫学研究。此外, 此细胞系还将在种质保存, 外源蛋白表达和齐口裂腹鱼体外生物学研究中发挥重要作用。     

斑石鲷肾脏细胞系的建立、特征分析及其免疫相关基因的表达分析

斑石鲷(Oplegnathus punctatus)是我国重要的海水养殖鱼类, 本研究以斑石鲷肾脏组织为材料, 建立了斑石鲷肾脏组织细胞系(O. punctatus kidney cell line, OPK)。斑石鲷肾脏细胞系生长旺盛, 目前已成功传至 34 代。本研究检测了不同 FBS 浓度对斑石鲷肾脏细胞生长的影响, 结果表明最适生长 FBS 浓度为 20%。将 OPK 细胞液氮冷冻复苏后, 细胞具有活性, 可正常生长和传代。核型分析结果显示, 第 24 代斑石鲷肾脏细胞系核型为正常二倍体核型(2n=2sm+46t)。将 Cy3-siRNA 转染到 OPK 细胞后, 可以成功表达荧光。对斑石鲷 OPK 细胞提取 DNA, 用斑石鲷线粒体色素细胞 C 氧化酶 I (CO I)基因进行检测, 结果表明该细胞系来源于斑石鲷。斑石鲷肾脏细胞系细胞在受到脂多糖(LPS)和聚肌胞苷酸(poly I∶C)刺激后能产生免疫反应, 免疫相关基因 IκB、IL-1β、IL-8 和 IRF3 的表达水平发生显著变化。本研究成功建立了斑石鲷肾脏细胞系, 可运用于斑石鲷基因功能分析、细胞遗传学、致病性细菌和病毒感染机制等研究, 可为斑石鲷的基础研究和细胞工程育种等提供重要的基础材料。     

草鱼–鳙–鲫零换水池塘有机碳、氮、磷收支研究

为研究草鱼(Ctenopharyngodon idella)–鳙(Aristichthys nobilis)–鲫(Carassius carassius)零换水池塘营养盐收支状况,阐明其零换水机制,以草鱼–鳙–鲫零换水池塘为实验组,以草鱼–鳙–鲫常规换水池塘为对照组,开展了为期2年的池塘有机碳(TOC)、氮(N)、磷(P)收支的研究。结果显示,2组池塘TOC、N、P的主要来源均为饲料投入,分别为77.06%和81.00%,92.08%和92.77%,94.18%和95.63%;TOC、N、P的主要输出途径均为底泥积累,分别占输入营养盐的43.32%和22.10%,61.40%和52.82%,78.71%和79.58%。2组池塘养殖鱼类收获分别占输入碳(C)、N、P的10.08%和13.05%,21.00%和25.57%,15.41%和18.60%。零换水池塘的C、N、P水体积累量和积累率均显著低于常规池塘(P<0.05),其积累率分别降低92.91%、88.52%和87.12%。零换水池塘的N、P底泥积累量显著高于常规池塘,但C、N底泥积累率显著低于常规池塘(P<0.05),分别降低了48.99%和13.97%。零换水池塘养殖鱼类的C、N、P利用率均显著高于常规池塘(P<0.05),分别提高了29.49%、21.72%和20.65%。研究表明,零换水模式能降低营养盐积累,有效提高系统物质利用率,是一种绿色高效养殖模式,具有较好的推广价值。     

家禽miRNA研究进展简

microRNA（miRNA）是近年来研究较为广泛的一种短小RNA,主要功能是调节与个体生长、发育、疾病发生过程有关基因的表达,参与生命过程中一系列重要进程,包括早期发育、细胞增殖、细胞凋亡、脂肪代谢、细胞分化等。作者主要概述了家禽miRNA对胚胎发育、性腺发育、肌肉生长、脂肪代谢的调控作用,并对家禽miRNA的研究前景进行了简单探讨,以期为下一步开展相关研究提供参考。     

广西规模化猪场2种主要排污模式的指标测定

应用常规的化学分析技术,测定了广西地区具有代表性的2个规模化猪场不同污水处理阶段的污染物含量,并与国家排放标准进行比较,研究每个处理环节污染指数的变化,从而为畜牧养殖业节能减排采取针对性的整改措施提供参考。污染物指标包括:悬浮物(SS)、氨氮(NH3-N)、五日生化需氧量(BOD5)和化学耗氧量(CODcr)。结果表明,2个规模化猪场排出的污水经过一定的污水处理工艺后,猪场1排放的污水不达标,猪场2排放的污水达标;植物塘对污水有明显的净化作用;沉淀调节池和二沉池环节都能有效降低悬浮物(SS)的指标。     

鲈鱼与养生

在广泛文献检索基础上,对鲈鱼的种属、营养成分、养生价值、代表性膳食及食用注意事项进行了概述,以期为全民养生保健提供科学资料。     

古典H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作平台的建立

利用RT-PCR技术扩增古典H1N1亚型猪流感病毒A/Swine/Guangdong/1/2011株的8个目的基因片段,分别克隆至双向转录表达载体p BD上。将8个重组质粒纯化后共转染293T细胞,48 h后收集上清,接种MDCK细胞。当细胞出现明显病变时,收集MDCK细胞上清,其血凝效价为1:64,与原始野生株血凝效价一致;提取拯救病毒的RNA并进行8个目的片段扩增及序列分析,测序结果显示与野生株病毒相同,表明病毒拯救成功。古典H1N1亚型猪流感病毒反向遗传操作平台的成功建立,不仅为探索流感病毒致病机理、感染机制及功能研究奠定了基础,同时也为H1N1亚型猪流感病毒新型疫苗的研制开辟了新的途径。     

川藏黑猪S04系选育研究

选用杜洛克公猪血缘9个（含精液）,母猪50头,组成S04系核心选育群。采用闭锁与开放相结合的选育方法,应用GBS软件进行遗传评估,主选产仔数、日增重与活体背膘厚等性状。经过多个世代的选育,经产母猪产仔数达10．36头,公猪达100kg体重日龄165．67d,活体背膘厚11．16mm,瘦肉率达64．22％,肌内脂肪含量2．88％;主选性状全面达到或超过育种目标,达配套系审定要求,成功培育了一个棕黑色的高瘦肉率专门化父系（S04系）。     

反刍动物微生态制剂研究进展.

微生态制剂通过改善反刍动物瘤胃及肠道微生态平衡,促进营养物质吸收,增强机体免疫和抗热应激能力。利用微生态制剂减少抗生素的使用量,符合人们对绿色、安全食品的需求,从而越来越受到人们的关注。本文综述了微生态制剂的作用机理,以及在反刍动物中的应用,并对其未来的前景和研究方向进行了分析。     

转录因子ＤＲＥＢ１Ａ基因和Ｂａｒ基因双价植物表达载体的构建及对马铃薯遗传转化的研究

 马铃薯在生长发育过程中受各种生物和非生物胁迫的影响,干旱是其中最常见和危害最严重的非生物胁迫因素之一,常常导致单产不高,总产不稳,严重影响着马铃薯产业的发展。本研究以改善马铃薯抗旱性为目的,采用ＰＣＲ方法从拟南芥中克隆了转录因子ＤＲＥＢ１Ａ 基因和诱导型启动子ｒｄ２９Ａ。利用ＤＮＡ 重组技术成功构建了诱导型启动子ｒｄ２９Ａ驱动转录因子ＤＲＥＢ１Ａ 基因和ＣａＭＶ３５Ｓ启动子驱动Ｂａｒ基因的双价植物表达载体ｐＢＩ１２１ｒｄ２９-ＢＤＲ,并通过农杆菌介导法对马铃薯进行遗传转化,ＰＰＴ 筛选得到２２株抗性苗,ＰＣＲ 和ＲＴ－ＰＣＲ 检测证明ＤＲＥＢ１Ａ 基因已整合到陇薯１０号马铃薯基因组中并在转基因植株中转录表达,有望提高转基因马铃薯的抗旱性。目前,作者正在进行转基因马铃薯的抗旱性分析研究。